發(fā)光細(xì)菌的急性毒性試驗(yàn)

添加日期：2017年10月17日 閱讀：4330

發(fā)光細(xì)菌作為毒性檢測(cè)的生物學(xué)方法，因其簡(jiǎn)便、快速、靈敏且成本較低而日益受到重視。本試驗(yàn)項(xiàng)目推薦兩個(gè)方法。一為國(guó)家環(huán)境保護(hù)局于1995年發(fā)布的發(fā)光細(xì)菌法(GB/T15441-1995)，采用的是海洋發(fā)光細(xì)菌菌種;二為淡水發(fā)光菌法，采用的是淡水型發(fā)光菌種。

明亮發(fā)光桿菌T3法(A)

本方法適用工業(yè)廢水、納污水體及實(shí)驗(yàn)室條件下，可溶性化學(xué)物質(zhì)的水質(zhì)急性毒性監(jiān)測(cè)。



1.原理

基于發(fā)光細(xì)菌相對(duì)發(fā)光度與水樣毒性組分總濃度呈顯著負(fù)相關(guān)(P≤0.05)，因而可通過(guò)生物發(fā)光光度計(jì)測(cè)定水樣的相對(duì)發(fā)光度，以此表示其急性水平。

水質(zhì)急性毒性水平可按選用相當(dāng)?shù)膮⒈任锫然�汞濃�?以mg/L為單位)來(lái)表征，或選用EC50值(半數(shù)有效濃度，以樣品液百分濃度為單位)來(lái)表征。

2.樣品的采集與保存

①采樣瓶使用聚四氟乙烯襯墊的玻璃瓶，務(wù)必清潔、干燥。采集水樣時(shí)，瓶?jī)?nèi)應(yīng)充滿水樣不留空氣。采樣后，用塑膠帶將瓶口密封。

②毒性測(cè)定應(yīng)在采樣后6h內(nèi)進(jìn)行。否則應(yīng)在2-5℃下保存樣品，但不得超過(guò)24h。報(bào)告中應(yīng)寫(xiě)明水樣采集時(shí)間和測(cè)定時(shí)間。

③對(duì)于含固體懸浮物的樣品須離心或過(guò)濾去除，以免干擾測(cè)定。

3.儀器設(shè)備

①生物發(fā)光光度計(jì)：配置2ml或5ml測(cè)試管。

當(dāng)氯化汞標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為0.10mg/L時(shí)，發(fā)光細(xì)菌的相對(duì)發(fā)光度為50%，其誤差不超過(guò)±10%。

②2ml或5ml測(cè)試樣品管(具標(biāo)準(zhǔn)磨口塞，為制造比色管的玻璃料制作，由專業(yè)玻璃儀器廠制造)，分別適用于相應(yīng)型號(hào)的生物發(fā)光光度計(jì)。

③微量注射器：10μl。

④注射器：lml。

⑤定量加液瓶：5ml。

⑥吸管：2ml、10m1、25ml。

⑦試劑瓶：l00ml。

⑧量筒：100ml,500ml。

⑨棕色容量瓶：50ml、250ml、1000ml。

⑩半微量滴定管(配磨口試液瓶，全套儀器均為棕色)：l0ml。

4.試劑和材料

除另有說(shuō)明外，本方法所用試劑均應(yīng)為符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的分析純?cè)噭�、蒸餾水或同等純度的水。

①氯化汞HgCl2。

②氯化鈉NaCl，化學(xué)純。

③明亮發(fā)光桿菌T3小種(PhotobacteriumphosphoreumT3spp.)凍干粉，安瓶瓶包裝，每瓶0.5g，在2-5℃冰箱內(nèi)有效保存期為6個(gè)月。新制備的發(fā)光細(xì)菌休眠細(xì)胞(凍干粉)密度不低于每克800萬(wàn)個(gè)細(xì)胞;當(dāng)按5(3)④步驟將凍干粉復(fù)蘇2min后即發(fā)光(可在暗室內(nèi)檢驗(yàn)，肉眼應(yīng)見(jiàn)微光)，稀釋成工作液后每毫升菌液不低于1.6萬(wàn)個(gè)細(xì)胞((5ml測(cè)試管)或2萬(wàn)個(gè)細(xì)胞(2ml測(cè)試管)(均為稀釋平板法測(cè)定)。在生物發(fā)光光度計(jì)上測(cè)出的初始發(fā)光量應(yīng)在600-1900mV之間，低于600mV允許將倍率調(diào)至“×2”檔，高于1900mV允許將倍率調(diào)整至“×0.5”檔。仍達(dá)不到標(biāo)準(zhǔn)者，更換凍干粉。

④氯化鈉溶液，3g/100m1：氯化鈉3g于玻璃容器內(nèi)，用量筒加蒸餾水l00ml。

⑤氯化鈉溶液，2g/l00ml氯化鈉2g，加蒸餾水l00ml于試劑瓶?jī)?nèi)，2-5℃保存。

⑥參比物氯化汞標(biāo)準(zhǔn)溶液：0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12、0.14、0.18、0.20、0.22、0.24mg/L。

⑦氯化汞母液，ρ=2000mg/L:1/萬(wàn)分析天平精稱密封保存良好的無(wú)結(jié)晶水氯化汞0.1000g于50ml容量瓶中，用3g/100m1氯化鈉溶液稀釋至刻度，置2-5℃冰箱備用，保存期6個(gè)月。

⑧氯化汞工作液，ρ=2mg/L：用移液管吸氯化汞2000mg/L母液l0ml于l000ml容量瓶中，用3g/l00ml氯化鈉溶液定容。再用移液管吸取氯化汞20mg/L液25ml于250m1容量瓶中，用3g/l00m]氯化鈉溶液定容。將此液倒入配有半微量滴定管的試液瓶，然后用3g/l00ml氯化鈉溶液將氯化汞2mg/L溶液按表5-3-6稀釋成系列濃度(一律采用50ml容量瓶)。氯化汞工作液保存期不能超過(guò)24h，超過(guò)者務(wù)必重配。



責(zé)任編輯：趙帥超 pndqq.cn 2017-10-17 16:16:17

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